Rola speksyny w funkcjonowaniu endokrynnym trzustki różnych gatunków
Type
Project
Date Issued
2017
Author
Discipline
biological sciences
Abstract (PL)
W proponowanym projekcie przewiduje się przeprowadzenie doświadczeń z udziałem speksyny na wyspach pozyskanych od szczurów oraz prosiąt. Od zwierząt post mortem zostaną pozyskane tkanki, co nie wymaga zgody Lokalnej Komisji ds. Doświadczeń na Zwierzętach. Z pobranych trzustek poprzez trawienie enzymatyczne zostaną wyizolowane wyspy trzustkowe. Uzyskane wyspy po okresie regeneracji będą wykorzystane w kilku rodzajach doświadczeń. Planuje się wykonanie eksperymentów określających sekrecję insuliny i glukagonu przy różnych stężeniach speksyny tj. 1, 10, 100 i 1000 nM, przy różnych stężeniach glukozy tj. 2, 6 i 16 mM oraz z zastosowanie antagonistów receptorów galaniny. Doniesienia literaturowe sugerują, że speksyna wiąże się z receptorami galaniny drugim i trzecim, zatem doświadczenia z zastosowaniem ich antagonistów pozwolą na zbadanie ewentualnego efektu fizjologicznego speksyny przy zablokowaniu tych receptorów. Osobne inkubacje ze speksyną zostaną przeprowadzone w celu pozyskania z wysp RNA i białek, które posłużą do analizy ekspresji genów insuliny, glukagonu, receptora insuliny, receptora glukagonu, PDX, IRS, aktywnej formy kaspazy-3 i 9 i białka PCNA. Ponadto wyspy zostaną użyte do testów MTT i BRDU w celu określenia przeżywalności i intensywności proliferacji ich komórek oraz określenia dokomórkowego napływu jonów wapnia.
Abstract (EN)
The proposed project envisages conducting experiments with spexin on islands obtained from rats and piglets. Tissues will be obtained from postmortem animals, which does not require the approval of the Local Animal Experiments Commission. Pancreatic islets will be isolated from the collected pancreas by enzymatic digestion. The obtained islands after the regeneration period will be used in several types of experiments. It is planned to perform experiments determining the secretion of insulin and glucagon at different concentrations of spexin, i.e. 1, 10, 100 and 1000 nM, at different glucose concentrations, i.e. 2, 6 and 16 mM, and with the use of galanin receptor antagonists. Literature reports suggest that spexin binds to the second and third galanin receptors, therefore experiments with their antagonists will allow to investigate the possible physiological effect of spexin in blocking these receptors. Separate incubations with spexin will be performed in order to obtain RNA and proteins from the islets that will be used to analyze the expression of insulin, glucagon, insulin receptor, glucagon receptor, PDX, IRS, active forms of caspase-3 and 9 and PCNA protein. In addition, the islands will be used for MTT and BRDU tests to determine the survival and proliferation intensity of their cells and to determine the intracellular influx of calcium ions.