Zmiany ekspresji mikroRNA wywołane przez homocysteinę oraz tiolakton homocysteiny

Celem projektu jest weryfikacja hipotezy, że homocysteina oraz tiolakton homocysteiny wywołują
zmiany ekspresji mikroRNA, które regulują geny zaangażowane w epigenetyczne mechanizmy. MikroRNA
stanowią klasę małych RNA, które odpowiadają za regulację ekspresji genów. Cząsteczki te swoiście
przyłączają się do komplementarnego mRNA i przecinają go, w skutek czego dochodzi do obniżenia
poziomu ekspresji genów. W naszych wstępnych badaniach wykazaliśmy wyraźny wpływ homocysteiny
i tiolaktonu homocysteiny na poziom mRNA kodujących białka zaangażowane w mechanizmy
epigenetyczne. Ponieważ na poziomie białka obserwujemy znacznie mniejsze zmiany, chcemy
przeanalizować wpływ omawianych metabolitów na profil ekspresji wybranych mikroRNA.
Nasza hipoteza zostanie przetestowana poprzez realizację poniższych celów badawczych:
1. Wykrycie mikroRNA, których profil ekspresji zostaje zmieniony po dodaniu homocysteiny oraz
tiolaktonu homocysteiny.
2. Zdefiniowanie mikroRNA odpowiadających za regulację ekspresji genów CBX2, EHMT2,
EZH2, SETD2, SMYD3 oraz innych genów zaangażowanych w regulacje epigenetyczne.
3. Potwierdzenie oddziaływania wytypowanych mikroRNA z mRNA CBX2, EHMT2, EZH2,
SETD2, SMYD3 oraz wybranymi genami.
4. Ustalenie poziomu ekspresji wytypowanych w celu 2 genów na poziomie mRNA oraz białka.
5. Analiza N-homocysteinylacji białek CBX2, EHMT2, EZH2, SETD2, SMYD3 i innych białek
przy zastosowaniu wysokosprawnej chromatografii cieczowej i spektrometrii mas.